Identifikasi Bakteri

 Morfologi Koloni Bakteri

Bakteri sering kali hidup dalam sel tunggal tetapi beberapa sel anakan tidak terpisah setelah pembelahan, sehingga akan menghasilkan suatu kelompok atau rantai sel yang terdapat bersama dalam lingkungan yang membentuk koloni. Pada permukaan medium, koloni bakteri terlihat seperti bulatan, titik berkilauan atau pucat, kuning atau putih, opaque atau translucent. Beberapa koloni mempunyai ciri garis tepi/batas, tapi sering tidak terlihat (Isaac and David, 1995). Koloni bakteri memiliki ukuran, bentuk, tepi, kemiringan dan struktur internal yang berbeda-beda. Karakter-karakter yang bervariasi antar koloni bakreri dapat digunakan untuk membedakan antara satu bakteri dengan bakteri lain dan untuk mengklasifikasikan bakteri (Salle, 1961).

Untuk mempelajari morfologi koloni bakteri, digunakan media nutrien cair, tegak dan miring. Pertumbuhan koloni bakteri pada media nutrien cair dapat digunakan untuk mengetahui sifat suatu bakteri berdasarkan respon terhadap oksigen bebas. Berdasarkan hal tersebut, bakteri dapat dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu aerobic (membutuhkan oksigen), anaerobic (tumbuh tanpa membutuhkan molekuler), anaerobic fakultatif (tumbuh pada keadaan aerobic dan anaerobic), dan mikroaerofilik (tumbuh baik jika ada oksigen atmoferik) (Pelczar dan Chan, 1986). Pertumbuhan bakteri pada media nutrien agar tegak menggunakan organisme yang diinokulasikan ke dalam medium dengan menusukkan orgnisme ke dalam medium dengan kedalaman paling tidak 2 inchi (Clifton, 1958). Pada nutrien agar miring, kultur bakteri diinokulasikan dengan menyentuhkan ujung ose dari ujung tabung ke arah mulut tabung, lalu diinkubasikan (Pelczar and Reid, 1958).

Pengujian Sifat Biokimia

Identifikasi dan determinasi dari suatu isolasi tidak cukup hanya berdasarkan sifat morfologinya saja tetapi perlu untuk diteliti sifat fisiologi dan biokimianya. Uji biokimia merupakan suatu uji dengan kisaran yang luas dari kisaran metabolism bakteri mengenai sumber yang digunakan, produk akhir metabolism, enzim yang terlibat (Nicklin et al., 1998).

Ada banyak nutrien yang digunakan mikrobia sebagai sumber energinya. Karbohidrat adalah sumber energy untuk pertumbuhan mikrobia. Salah satu kegiatan mikrobia yang melibatkan karbohidrat adalah proses fermentasi karbohidrat, pada Bacillus subtilis dan Escherichia coli menggunakan laktosa dan glukosa. Produk dari fermentasi adalah asam, alcohol, dan karbondioksida. Timbulnya gas karbondioksida dan alcohol dapat menjadi indikasi bahwa proses fermentasi berjalan dengan baik ( Beishir,1996).

Selain itu uji sifat bioimia lainnya adalah pembentukan indol. Pembentukan indol mendeteksi adanya triptofan. Indole adalah senyawa berbau busuk hasil degradasi kasein menjadi triptofan. Identifikasi adanya indol dengan adanya cincin merah pada larutan dengan menggunakan reagen Elich dan eter yang berfungsi mengkondensasi triptofan.

Nitrat merupakan salah satu substrat yang digunakan bakteri. Reduksi nitrat terjadi pada keadaan anaerob yaitu bila kadar O₂ rendah. Pada pengujian nitrat, digunakan reagen asam sulfosalisilat dan α-napthol. Reduksi nitrat dapat dideteksi dengan tes keadaan nitrit setelah bakteri tumbuh pada nutrien cair yang ditambahkan KNO₃. Aktivitas mikrobia menghasilkan produk yang macamnya tergantung enzim yang dimiliki. Ada kemungkinan suatu nitrat dapat diubah atau direduksi menjadi nitrit, nitrat tidak berubah dan nitrat secara cepat direduksi oleh bakteri menjadi nitrit ( Prescott,1999)

Susu mengandung kasein susu (protein), karbohidrat, lemak, dan yang lainnya sehingga dapat pula digunakan oleh mikrobia sebagai tempat tumbuh. Beberapa bakteri mensekresi enzim seperti enzim renin yang dapat menghidrolisis kasein menjadi parakasein dan pepton. Parakasein kemudian akan bereaksi dengan garam kalsium dalam larutan sehingga terbentuk pengendapan parakasein atau kalsium parakaseinat (Prescott,1999).